尋求改進質(zhì)量和提高效率的藥品生產(chǎn)商對使用Sievers^® 總有機碳（TOC）分析儀進行清潔驗證的興趣越來越濃。大多數(shù)制藥或生物科技廠家目前都配有TOC分析儀以符合美國藥典USP、中國藥典ChP的水檢測要求，以放行純化水或注射用水用于清潔或生產(chǎn)過程。因此，大多數(shù)廠家已經(jīng)擁有用于清潔驗證的TOC測定方法。

1996年，國際協(xié)調(diào)會議（ICH）在FDA（CDER & CBER^②）的協(xié)助下，創(chuàng)建了指導(dǎo)文件《Q2B：分析步驟的驗證》。該文檔的目的是為制藥公司如何考慮清潔驗證分析程序的各種驗證特征提供參考。本文提供了與下列參數(shù)相關(guān)的多個實例，這些實例均與TOC方法驗證有關(guān)，因而此應(yīng)用說明呼應(yīng)了Q2B指導(dǎo)文件：

• 檢出限和定量限
  

• 確定分析物的準確度和精確度
  

• 線性和回收百分比
  

• 分析方法的穩(wěn)固性^③

檢出限和定量限

檢出限（LOD）用于評估何時信號是儀器噪音的結(jié)果還是化合物的反應(yīng)。LOD被視為樣本中分析物的zui低檢測量，但沒有必要的足夠的統(tǒng)計確定性來定量。

確定分析物的準確度和精確度

了解TOC分析方法驗證中準確度和精確度的區(qū)別非常重要。準確度與測得值和分析物的真實值的接近程度相關(guān)。通常，準確度是計算儀器驗證時測得的標準品的TOC濃度與預(yù)期的標準品TOC濃度的差值百分比（即+7%）所得。

線性和回收百分比驗證

通常，線性測試校驗儀器反應(yīng)值是否與所研究分析物的濃度具有線性關(guān)系。圖1演示了TOC濃度范圍從1.00 ppm到7.50 ppm，牛血清白蛋白（BSA）的線性關(guān)系，其中含低TOC水的小瓶中加了已知濃度的BSA。這個例子演示了理論濃度（x軸）對所測得的濃度（y軸）作圖所得到的兩者之間的線性關(guān)系，y=(m)x+b。分析儀的反應(yīng)值與所研究化合物的相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng)大于0.97。

分析方法的穩(wěn)固性

與實際回收率同樣重要的是，用于確定所研究化合物回收百分比的TOC分析方法的重現(xiàn)性或穩(wěn)健性。在清潔驗證方法開發(fā)中穩(wěn)固性是指結(jié)果不受方法中參數(shù)、或樣本之間的小而微妙的變化的影響的能力。還提供了正常使用期間的可靠性指示（例如各個分析員的取樣方法）。若希望得到高回收率，回收率一直保持可重復(fù)性也同等重要或更為重要，并在整個方法開發(fā)期間一直需要對回收率進行檢測。表1和表2提供了CIP-100棉簽回收率分析信息，由兩個不同的分析員測試樣本間的變化。

要考慮的最后幾點

評估制藥產(chǎn)品質(zhì)量水平的測試步驟要遵從各項要求。具體到清潔驗證來說，當前的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范［21 CFR 211.194(a)] 要求，用于評估藥品是否符合已建立規(guī)范的測試方法必須滿足準確度和可靠性的合適標準^⑦。

1. FDA網(wǎng)站：fda.gov/cder/guidance/cGMPs/equipmenthtm。

2. 藥品評估與研究中心（CDER）和生物制品評估和研究中心（CBER)。

3. Guidance for industry Q2B: Validation of Analytical Procedures. Methodology. November 1996. ICH, FDA, CDER, CBER.

4. Taylor, John K. Quality Assurance of Chemical Measurements. Lewis Publishers imprint of CRC Press; 1987.

5. USP<1225>Validation of Compendial Methods.

6. The Swab Recovery Determination of CIP-100 in Solutions by TOC Analysis Using a Sievers TOC Analyzer, Steris Corporation Analytical Method; 1993. 7. 21 CFR 211.194(a) Laboratory Records.

7. 21 CFR 211.194(a) Laboratory Records.